عناصر و ترکیبات تشکیل دهنده محیط های کشت :
کربن در کربو هیدرات :
منبع کربن کربوهیدرات ها یا قندها هستند که وظیفه تأمین انرژی سلول را بر عهده دارند. نوع قند مورد استفاده برای انرژی در محیط های رشد به توانایی سلول در استفاده از قندها بستگی دارد.قیمت اون ازمایشگاهی در برخی از محیطها از گلوکز و گالاکتوز و در برخی دیگر از مالتوز استفاده می شود.
آمینو اسیدها :
آمینو اسیدها چون برای ساخت پروتئین ها لازم است در همه محیط های رشد موجود است. سلول ها برای رشد خود به انواع آمینو اسیدها نیاز دارند که برخی از آن ها را خودشان تولید می کنند و برخی دیگر را از محیط کشت تامین می کنند.
لیپید ها و اسید های چرب :
چون سرم ها حاوی اسیدهای چرب هستند پس اضافه کردن اسیدهای چرب در محیط های سرم دار لازم نیست. در محیط بدون سرم برای رشد سلول باید لیپید اضافه شود.
ویتامین ها :
ویتامین ها باعث رشد و تکثیر سلولی می شوند. از آنجا که ویتامین ها توسط سلول ها ساخته نمی شوند ، باید به محیط کشت اضافه شوند. در محیط کشت حاوی سرم ، ویتامین های محلول در چربی در محیط وجود دارند و نیازی به افزودن ندارند.
نمک های غیرآلی :
سلولهای موجود در محیط رشد باید با یکدیگر ارتباط برقرار کنند و این امر از طریق غشاء انجام می شود که باید غلظت محلول نمکی را تنظیم کند. با افزودن یون هایی مانند سدیم ، پتاسیم و کلسیم به شکل نمک های معدنی ، تعادل اسمزی حفظ شده و پتانسیل غشای سلولی تنظیم می شود.
رنگ فنول رد :
رنگ ها به عنوان شناساگر PH و ناظر بر تنظیم آن هستند و رنگ آن ها متناسب با مواد رها شده توسط سلول ها تغییر می کند. در PH های پایین رنگ محیط زرد و در PH های بالا رنگ بنفش و در بهترین شرایط رشد باکتری، محیط قرمز است.
سیستم بافری :
بافر به عنوان تنظیم کننده pH نقش مهمی در رشد سلول ها ایفا می کند. یکی از راههای تنظیم اسیدیته که بسیار ارزان نیز هست ، استفاده از دی اکسید کربن است که از ترکیبات کربناته محیط رشد آزاد می شود و سیستم بافر طبیعی و غیر سمی است. HEPES سیستم دیگری است که نیازی به گازهای جوی ندارد و یک سیستم شیمیایی کم هزینه با زویتریون است.
عناصر کمیاب و مکمل های محیط کشت :
عناصری مانند روی ، مس ، سلنیوم و… به محیطهای بدون سرم اضافه می شوند. وجود این عناصر برای فرآیندهایی مانند تولید آنزیم ها ضروری است. محیط کشت کامل باید حاوی مکمل هایی باشد که در محیط پایه و سرم وجود ندارد. به این محیطهای رشد ، که برای رشد و تکثیر سلولهای خاص لازم است ، ترکیباتی مانند هورمونها و عوامل رشد (با احتیاط) اضافه می شود.
آنتی بیوتیک ها :
هنگامی که آلودگی قارچی و باکتریایی در محیط در حال رشد وجود داشته باشد ، از آنتی بیوتیک ها استفاده می شود. استفاده بیش از حد از آنتی بیوتیک ها متابولیسم سلول های حساس را مختل کرده و آلودگی باکتری های مقاوم را پنهان می کند.
کاربرد محیط کشت tsi
محیط های کشت پر کاربرد :
محیط های رشد مورد استفاده برای رشد میکروارگانیسم ها فراوان است. در اینجا چند نمونه آورده شده است.
کشت در محیط tsi
آزمایش آهن قند سه گانه (TSI) یک آزمایش میکروبیولوژیکی است که توانایی میکروارگانیسم ها را در تخمیر قندها و تولید سولفید هیدروژن بررسی می کند. این آزمایش اغلب برای تمایز بین باکتری های روده ، از جمله سالمونلا و شیگلا استفاده می شود.
ترکیبات محیط کشت tsi
شیب TSI یک لوله آزمایش حاوی آگار ، رنگ حساس به pH (فنل رد شده) ، 1٪ لاکتوز ، 1٪ ساکارز ، 0.1٪ گلوکز و تیوسولفات سدیم و سولفات آهن یا سولفات آهن آمونیوم است.
محدودیت های محیط کشت آگار TSI
برای شناسایی کامل، انجام آزمایش بیوشیمیایی، ایمونولوژیک، مولکولی یا طیف سنجی جرمی بر روی کلنی های به دست آمده از کشت خالص توصیه می شود.
مهم است که فرآیند پریک برای این روش انجام شود و اگر این اتفاق نیفتد نتایج آزمایش اعتبار خود را از دست می دهد. به طور خلاصه، فرآیند نیش زدن شامل حذف باکتری ها از آگار با یک حلقه یا نوک سوزن و قرار دادن آن در عمق آگار است. همچنین مهم است که آگار ساختار یکپارچه خود را در طول فرآیند تثبیت از دست ندهد. در حین انجام این تست باید درپوش ها شل شوند، در غیر این صورت نتایج اشتباهی رخ می دهد.
آگار TSI باید در طول دوره انکوباسیون 18-24 ساعته خوانده شود. اگر خیلی زود خوانده شود، ممکن است یک واکنش مثبت کاذب مشاهده شود. اگر بعد از 24 ساعت خوانده شود، ممکن است یک واکنش منفی کاذب مشاهده شود.
ارگانیسمی که سولفید هیدروژن تولید می کند می تواند تولید اسید را در اعماق محیط بپوشاند. با این حال، تولید سولفید هیدروژن نیاز به یک محیط اسیدی دارد، بنابراین قسمت لب به لب باید اسیدی در نظر گرفته شود.
TSI در مقایسه با سایر رسانه های حاوی آهن مانند محیط ایندول سولفید (SIM) به تشخیص سولفید هیدروژن حساس نیست.
برخی از گونه‌ها یا سویه‌ها ممکن است واکنش‌های تاخیری ایجاد کنند یا کربوهیدرات‌ها را به‌طور کامل تخمیر نکنند.
https://hakimazma.com/%d8%af%d8%b3%d8%aa%da%af%d8%a7%d9%87/%da%a9%d9%88%d8%b1%d9%87/
طرز ساخت محیط کشت tsi
همه این مواد با حرارت ترکیب شده و استریل می شوند و در نهایت لوله حاوی محیط به صورت مور یا شیب قرار می گیرد تا محتویات را سخت کند و محیط ظرف دارای عمق و سطح شیب دار است. شکل مایل محیط امکان کشت باکتری های هوازی و بی هوازی را بر روی این محیط فراهم می کند. این بدان معناست که این محیط درجات مختلفی از اکسیژن را تأمین می کند.
عناصر و ترکیبات تشکیل دهنده محیط های کشت :
کربن در کربو هیدرات :
منبع کربن کربوهیدرات ها یا قندها هستند که وظیفه تأمین انرژی سلول را بر عهده دارند. نوع قند مورد استفاده برای انرژی در محیط های رشد به توانایی سلول در استفاده از قندها بستگی دارد.قیمت اون ازمایشگاهی در برخی از محیطها از گلوکز و گالاکتوز و در برخی دیگر از مالتوز استفاده می شود.
آمینو اسیدها :
آمینو اسیدها چون برای ساخت پروتئین ها لازم است در همه محیط های رشد موجود است. سلول ها برای رشد خود به انواع آمینو اسیدها نیاز دارند که برخی از آن ها را خودشان تولید می کنند و برخی دیگر را از محیط کشت تامین می کنند.
لیپید ها و اسید های چرب :
چون سرم ها حاوی اسیدهای چرب هستند پس اضافه کردن اسیدهای چرب در محیط های سرم دار لازم نیست. در محیط بدون سرم برای رشد سلول باید لیپید اضافه شود.
ویتامین ها :
ویتامین ها باعث رشد و تکثیر سلولی می شوند. از آنجا که ویتامین ها توسط سلول ها ساخته نمی شوند ، باید به محیط کشت اضافه شوند. در محیط کشت حاوی سرم ، ویتامین های محلول در چربی در محیط وجود دارند و نیازی به افزودن ندارند.
نمک های غیرآلی :
سلولهای موجود در محیط رشد باید با یکدیگر ارتباط برقرار کنند و این امر از طریق غشاء انجام می شود که باید غلظت محلول نمکی را تنظیم کند. با افزودن یون هایی مانند سدیم ، پتاسیم و کلسیم به شکل نمک های معدنی ، تعادل اسمزی حفظ شده و پتانسیل غشای سلولی تنظیم می شود.
رنگ فنول رد :
رنگ ها به عنوان شناساگر PH و ناظر بر تنظیم آن هستند و رنگ آن ها متناسب با مواد رها شده توسط سلول ها تغییر می کند. در PH های پایین رنگ محیط زرد و در PH های بالا رنگ بنفش و در بهترین شرایط رشد باکتری، محیط قرمز است.
سیستم بافری :
بافر به عنوان تنظیم کننده pH نقش مهمی در رشد سلول ها ایفا می کند. یکی از راههای تنظیم اسیدیته که بسیار ارزان نیز هست ، استفاده از دی اکسید کربن است که از ترکیبات کربناته محیط رشد آزاد می شود و سیستم بافر طبیعی و غیر سمی است. HEPES سیستم دیگری است که نیازی به گازهای جوی ندارد و یک سیستم شیمیایی کم هزینه با زویتریون است.
عناصر کمیاب و مکمل های محیط کشت :
عناصری مانند روی ، مس ، سلنیوم و… به محیطهای بدون سرم اضافه می شوند. وجود این عناصر برای فرآیندهایی مانند تولید آنزیم ها ضروری است. محیط کشت کامل باید حاوی مکمل هایی باشد که در محیط پایه و سرم وجود ندارد. به این محیطهای رشد ، که برای رشد و تکثیر سلولهای خاص لازم است ، ترکیباتی مانند هورمونها و عوامل رشد (با احتیاط) اضافه می شود.
آنتی بیوتیک ها :
هنگامی که آلودگی قارچی و باکتریایی در محیط در حال رشد وجود داشته باشد ، از آنتی بیوتیک ها استفاده می شود. استفاده بیش از حد از آنتی بیوتیک ها متابولیسم سلول های حساس را مختل کرده و آلودگی باکتری های مقاوم را پنهان می کند.
کاربرد محیط کشت tsi
محیط های کشت پر کاربرد :
محیط های رشد مورد استفاده برای رشد میکروارگانیسم ها فراوان است. در اینجا چند نمونه آورده شده است.
کشت در محیط tsi
آزمایش آهن قند سه گانه (TSI) یک آزمایش میکروبیولوژیکی است که توانایی میکروارگانیسم ها را در تخمیر قندها و تولید سولفید هیدروژن بررسی می کند. این آزمایش اغلب برای تمایز بین باکتری های روده ، از جمله سالمونلا و شیگلا استفاده می شود.
ترکیبات محیط کشت tsi
شیب TSI یک لوله آزمایش حاوی آگار ، رنگ حساس به pH (فنل رد شده) ، 1٪ لاکتوز ، 1٪ ساکارز ، 0.1٪ گلوکز و تیوسولفات سدیم و سولفات آهن یا سولفات آهن آمونیوم است.
محدودیت های محیط کشت آگار TSI
برای شناسایی کامل، انجام آزمایش بیوشیمیایی، ایمونولوژیک، مولکولی یا طیف سنجی جرمی بر روی کلنی های به دست آمده از کشت خالص توصیه می شود.
مهم است که فرآیند پریک برای این روش انجام شود و اگر این اتفاق نیفتد نتایج آزمایش اعتبار خود را از دست می دهد. به طور خلاصه، فرآیند نیش زدن شامل حذف باکتری ها از آگار با یک حلقه یا نوک سوزن و قرار دادن آن در عمق آگار است. همچنین مهم است که آگار ساختار یکپارچه خود را در طول فرآیند تثبیت از دست ندهد. در حین انجام این تست باید درپوش ها شل شوند، در غیر این صورت نتایج اشتباهی رخ می دهد.
آگار TSI باید در طول دوره انکوباسیون 18-24 ساعته خوانده شود. اگر خیلی زود خوانده شود، ممکن است یک واکنش مثبت کاذب مشاهده شود. اگر بعد از 24 ساعت خوانده شود، ممکن است یک واکنش منفی کاذب مشاهده شود.
ارگانیسمی که سولفید هیدروژن تولید می کند می تواند تولید اسید را در اعماق محیط بپوشاند. با این حال، تولید سولفید هیدروژن نیاز به یک محیط اسیدی دارد، بنابراین قسمت لب به لب باید اسیدی در نظر گرفته شود.
TSI در مقایسه با سایر رسانه های حاوی آهن مانند محیط ایندول سولفید (SIM) به تشخیص سولفید هیدروژن حساس نیست.
برخی از گونه‌ها یا سویه‌ها ممکن است واکنش‌های تاخیری ایجاد کنند یا کربوهیدرات‌ها را به‌طور کامل تخمیر نکنند.
https://hakimazma.com/%d8%af%d8%b3%d8%aa%da%af%d8%a7%d9%87/%da%a9%d9%88%d8%b1%d9%87/
طرز ساخت محیط کشت tsi
همه این مواد با حرارت ترکیب شده و استریل می شوند و در نهایت لوله حاوی محیط به صورت مور یا شیب قرار می گیرد تا محتویات را سخت کند و محیط ظرف دارای عمق و سطح شیب دار است. شکل مایل محیط امکان کشت باکتری های هوازی و بی هوازی را بر روی این محیط فراهم می کند. این بدان معناست که این محیط درجات مختلفی از اکسیژن را تأمین می کند.
ثبت علامت تجاری