تعیین غلظت پروتئین خون به روش فتومتریک

sayon 
  بازدید : 22
شنبه 5 اسفند 1402 زمان : 21:10 


1
2
3
4
5

تعیین غلظت پروتئین های موجود خون چه اهمیتی دارد؟

بیش از 300 نوع پروتئین در پلاسما وجود دارد که نقش های مختلفی در انعقاد خون، نقل و انتقال، سیستم ایمنی، تثبیت فشار اسمزی خون و غیره دارند. هود لامینار اختلال در تولید پروتئین ها می تواند تهدید کننده سلامتی فرد باشد. زیرا کاهش و یا افزایش غلظت پروتئین خون می تواند نشان دهنده بروز بیماری می باشد. به کمک تکنیک الکتروفورز پروتئین های خون به 5 دسته اصلی گلوبولین آلفا 1، آلفا 2، گاما، بتا و آلبومین تقسیم می شوند.

از آن جا که تغییر در غلظت پروتئین خون می تواند هشداری برای سلامت فرد باشد، انجام این آزمایش بسیار مهم است. در ادامه با این پروتئین ها و نحوه انجام تست به وسیله تجهیزات و دستگاه های مورد نیاز بیشتر آشنا می شویم.

غلظت طبیعی توتال پروتئین در انسان سالم

توتال پروتئین به دو دسته کلی پروتئین های آلبومین و گلوبولین گفته می شود که پروتئین های اصلی تشکیل دهنده خون انسان می باشند.

غلظت طبیعی توتال پروتئین در سرم انسان بالغ 6 تا 8 g/dl و در کودکان 5 تا 7 g/dl می باشد.

علل و عوارض کاهش و افزایش سطح پروتئین های خون

اگر سطح غلظت پروتئین خون از حد طبیعی بالا تر یا پایین تر بیاید، می تواند نشان دهنده نقص هایی در ارگان های مختلف بدن باشد.

افزایش غلظت پروتئین توتال (هایپرپروتئینمی): Hyperproteinemia اغلب در اثر از دست دادن آب بدن رخ می دهد و عوارضی مانند اسهال در فرد دارد.
کاهش غلظت پروتئین توتال (هیپوپروتئینمی): Hypoproteinemia در اثر عملکرد نادرست کلیه، فقر غذایی، سوختگی، سنتز ناقص در کبد و غیره به وجود می آید.

اساس واکنش بیوره به منظور تعیین غلظت پروتئین های خون

یکی از واکنش های مورد استفاده برای تشخیص وجود پروتئین، پیوند های پپتیدی و غلظت پروتئین خون در نمونه واکنش بیوره می باشد. اساس این واکنش بدین گون هاست که یون مس دو ظرفیتی در حضور ترکیبات حاوی پیوند پپتیدی در محیط قلیایی کمپلکس بنفش رنگی ایجاد می کند. در واقع در این آزمایش، ترکیب مورد نظر باید 2 یا بیشتر از 2 پیوند پپتیدی داشته باشد.

روش فتومتریک برای تعیین غلظت توتال پروتئین

با استفاده از کیت تعیین غلظت توتال پروتئین سرم و مطابق با دستورالعمل درج شده برروی کیت می توانید این تست را به راحتی انجام دهید. کیت های استاندارد آزمایشگاهی تعیین غلظت پروتئین خون را می توانید از مراکز معتبر فروش تجهیزات آزمایشگاهی و پزشکی تهیه کنید.

مراحل آماده سازی محلول های لازم برای تعیین مجموع غلظت پروتئین های خون

برای انجام آزمایش اندازه گیری غلظت خون سه محلول بلانک، استاندارد و مجهول مورد نیاز است. روش تهیه هر کدام از این محلول ها در جدول زیر درج شده است.

	محلول بلانک	محلول استاندارد	محلول تست
استاندارد	–	20 میکرولیتر	–
سرم	–	–	20 میکرولیتر
معرف R₁	1000 میکرولیتر	1000 میکرولیتر	1000میکرولیتر
معرف R₂	250 میکرولیتر	250 میکرولیتر	250 میکرولیتر

ابتدا برای آماده سازی لوله بلانک 1000 میکرولیتر از معرف R₁ و 250 میکرولیتر از معرف R₂ به لوله اضافه کرده و باهم مخلوط کنید. دستگاه اسپکتروفتومتر را بر روی طول موج 546 نانومتر تنظیم کنید و با محلول بلانک دستگاه را صفر کنید.

برای آماده سازی لوله استاندارد، 20 میکرولیتر از محلول استاندارد و 1000 میکرولیتر از معرف R₁ را با هم مخلوط کرده و پس از گذشت 5 دقیقه، جذب اولیه لوله استاندارد را از روی دستگاه اسپکتروفتومتر یادداشت کنید. سپس 250 میکرولیتر از معرف R₂ را به لوله آزمایش اضافه کرده و مجددا پس از گذشت 5 دقیقه جذب ثانویه را از روی دستگاه یادداشت کنید.

برای آماده سازی لوله تست، 20 میکرولیتر از سرم به همراه 1000 میکرولیتر از معرف R₁را در لوله آزمایش ریخته و با یکدیگر مخلوط کنید. پس از گذشته 5 دقیقه جذب اولیه لوله تست را روی دستگاه مشاهده و یادداشت کنید. سپس 250 میکرولیتر از معرف R₂ به لوله اضافه کنید، 5 دقیقه صبر کرده و جذب ثانویه را از روی دستگاه یادداشت کنید.

اختلاف جذب اولیه و ثانویه را بدست آورده و در غلظت استاندارد توتال پروتئین ضرب کنید(gr/dl 6) تا غلظت محلول توتال پروتئین بدست آید.

https://hakimazma.com/%d9%87%d9%88%d8%af-%d8%a2%d8%b2%d9%85%d8%a7%db%8c%d8%b4%da%af%d8%a7%d9%87%db%8c/%d9%87%d9%88%d8%af-%d8%b4%db%8c%d9%85%db%8c%d8%a7%db%8c%db%8c/

نتایج آزمایش های بیوشیمی در پیشگیری و درمان بسیاری از بیماری ها می توانند تعیین کننده باشند. بنابراین استفاده از تجهیزات مناسب، به روز و از همه مهم تر کالیبره در آزمایشگاه ها نقش مهمی دارند.